在操作酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)，有很多技術(shù)問(wèn)題是比較常見(jiàn)且易錯(cuò)的，而就是這些問(wèn)題困惑不少實(shí)驗(yàn)操作員。上海恒遠(yuǎn)根據(jù)技術(shù)部的問(wèn)題處理總結(jié)，這些常見(jiàn)的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)問(wèn)題您也在問(wèn)？
一、為什么必須設(shè)置復(fù)孔？
為獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)，因?yàn)閺?fù)孔檢測(cè)可以：計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。
二、重復(fù)性差怎么辦？
1.樣品數(shù)量不一，加樣時(shí)間長(zhǎng)短不一(恒遠(yuǎn)來(lái)解決：重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近)。
2.酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)或輸入波長(zhǎng)不對(duì)(恒遠(yuǎn)來(lái)解決：TMB顯色用450/630波長(zhǎng))。
3.酶標(biāo)儀測(cè)定重復(fù)性差(恒遠(yuǎn)來(lái)解決：校對(duì)酶標(biāo)儀)。
三、為什么標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性較差
需要按照推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品；溶解標(biāo)準(zhǔn)品之前需短暫離心，*收集粉末；確保標(biāo)準(zhǔn)品*溶解和混勻，然后再進(jìn)行后續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且移液；顯色的恰當(dāng)終止；選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
四、為什么所有試劑和檢測(cè)樣本要平衡至室溫后再進(jìn)行加樣操作
溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測(cè)樣本。避免因溫度的動(dòng)力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致ELISA檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。
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