在ELISA試劑盒實驗中科研新手總會遇到各種不同棘手的問題，比如空白值過高怎么辦？樣本要如何采集？血清能否反復(fù)凍融？等等，今天上海恒遠(yuǎn)要為您講解的是在實驗中樣品或標(biāo)準(zhǔn)品“溢值”是什么原因造成的。
造成樣品或標(biāo)準(zhǔn)品 “溢值” 主要有以下幾點原因：
1）樣品/標(biāo)準(zhǔn)品不正確稀釋
要嚴(yán)格按照說明書來稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。
2）偶合試劑不正確稀釋
要嚴(yán)格按照說明書來稀釋偶合試劑，濃度過高會造成OD的 “溢值” HRP偶合試劑的不正確稀釋
3）所用稀釋液不對
只能使用相應(yīng)試劑盒內(nèi)的稀釋液稀釋樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。
4）檢測波長不正確
要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。
5）TMB底物的顯色時間過長
請監(jiān)控顯色時間。說明書中所示的顯色時間可能因為溫度和其它檢測條件的不同而稍有變化。
6）樣品不適合此檢測
在說明書中會列出每種產(chǎn)品的適用標(biāo)本范圍，超出范圍的標(biāo)本可能不適于此試劑盒或者檢測條件需要摸索（如調(diào)節(jié)稀釋度等）
7）樣品/標(biāo)準(zhǔn)品污染
樣品或標(biāo)準(zhǔn)品的污染可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果“溢值”。
8）孵育時間/溫度不正確
要嚴(yán)格按照說明書來確定孵育時間和溫度。
9）在孵育時為蓋上酶聯(lián)板覆蓋物
在孵育時需蓋上酶聯(lián)板覆蓋物，以防止液體蒸發(fā)或孵育期間的污染。每個試劑盒內(nèi)均有足夠數(shù)量的酶聯(lián)板覆蓋物
如果您的實驗也同樣遇到樣品或標(biāo)準(zhǔn)品“溢值”，那么就需要仔細(xì)檢查是否是您試劑的問題或者是操作方法不當(dāng)?shù)膯栴}。只有質(zhì)量良好的試劑和正確的操作才是的實驗搭檔。
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