人激肽釋放酶8elisa試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
　　Elisakit規(guī)格：48孔配置/96孔配置
　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5ml×1瓶
　　酶標(biāo)試劑：3ml×1瓶（48）/6ml×1瓶（96）　　
　　【人激肽釋放酶8（KLK8）elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用　　
　　計(jì)算：　　
　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。　　　　試劑盒組成：　　
　　封板膜:2片（48）/2片（96）　　
　　說(shuō)明書(shū):1份　　
　　密封袋:1個(gè)　　
　　標(biāo)準(zhǔn)品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存　　
　　酶標(biāo)包被板:1×481×962-8℃保存　　
　　樣品稀釋液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　顯色劑A液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　顯色劑B液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　終止液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存　　
　　濃縮洗滌液:（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存　　
　　實(shí)驗(yàn)原理：　　
　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人激肽釋放酶8（KLK8）水平。用純化的人激肽釋放酶8（KLK8）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入激肽釋放酶8（KLK8），再與HRP標(biāo)記的激肽釋放酶8（KLK8）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的激肽釋放酶8（KLK8）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人激肽釋放酶8（KLK8）濃度。　　
　　目的：本試劑盒用于測(cè)定讓人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中激肽釋放酶8（KLK8）的含量。　　
　　服務(wù)承諾：　　
　　供貨期：款到發(fā)貨。　　
　　工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢(xún)和指導(dǎo)。請(qǐng)　　
　　為客戶(hù)提供來(lái)樣檢測(cè)服務(wù)，zui大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性（免費(fèi)代測(cè)）。　　
　　保存條件及有效期：　　
　　試劑盒保存：2-8℃|有效期：6個(gè)月　　
　　【人激肽釋放酶8（KLK8）elisa試劑盒】樣本處理及要求：　　
　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。　　
　　2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。　　
　　3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。　　
　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。　　
　　5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。　　
　　6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.　　
　　7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。　　
　　人激肽釋放酶elisa試劑盒操作步驟　　
　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。　　
　　2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。　　
　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。　　
　　4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。　　
　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。　　
　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。　　
　　7.溫育：操作同3。　　
　　8.洗滌：操作同5。　　
　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.　　
　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。　　
　　11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。　　
　　人激肽釋放酶elisa試劑盒注意事項(xiàng)：　　
1．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。　　
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。　　
3．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).